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正確清洗凝膠濾膜是保障實驗數據可靠性的必要措施

更新時間:2025-08-25      瀏覽次數:20
   凝膠濾膜作為尺寸排阻色譜(SEC)或脫鹽純化中的核心分離介質,其性能直接影響實驗結果的準確性與重復性。隨著使用次數增加,膜表面及孔道內易吸附蛋白質、脂類或顆粒雜質,導致通量下降、分離效率降低。因此,掌握正確的清洗方法,不僅是延長凝膠濾膜壽命的關鍵,更是保障實驗數據可靠性的必要措施。
 

 

  一、清洗原則:溫和有效,防止損傷
 
  凝膠濾膜多由交聯葡聚糖、瓊脂糖等親水性高分子材料制成,結構脆弱,不耐高壓、強酸、強堿或有機溶劑。清洗應遵循“低壓力、適pH、防脫水”的原則,避免破壞其三維多孔網絡結構。
 
  二、常規清洗步驟
 
  沖洗殘留物
 
  實驗結束后,立即用至少5-10倍柱體積的去離子水或初始緩沖液沖洗系統,去除未結合的樣品和鹽分,防止沉淀堵塞孔道。
 
  去除弱吸附物
 
  使用0.1–0.5mol/LNaCl溶液沖洗,可有效清除因離子相互作用產生的非特異性吸附雜質,適用于大多數情況。
 
  深度清洗(去蛋白)
 
  對于蛋白質殘留嚴重的情況,推薦使用含0.5–1mol/LNaOH的溶液進行清洗。堿性條件可水解并去除大多數有機污染物。注意:瓊脂糖基濾膜可耐受0.5–1MNaOH(清洗時間≤30分鐘),而葡聚糖基材料則不耐強堿,應避免使用。
 
  去除脂類或疏水性雜質
 
  可采用30%–70%的乙醇或異丙醇短時沖洗(≤1小時),但需注意有機溶劑可能導致部分凝膠收縮,沖洗后應充分用水平衡。
 
  三、特殊清洗方案
 
  變性劑清洗:對于頑固蛋白聚集體,可用6M尿素或4M鹽酸胍溶液沖洗,隨后逐步降低濃度平衡。
 
  去垢劑輔助:添加0.1%–0.5%非離子型去垢劑(如TritonX-100或Tween-20)可增強脂蛋白去除效果,但需沖洗避免殘留干擾后續實驗。
 
  四、保存與防干涸
 
  清洗完成后,應將濾膜保存在20%乙醇或0.02%的緩沖液中,防止微生物滋生。切忌干燥保存,干涸會導致孔結構塌陷。
 
  五、驗證清洗效果
 
  定期檢測純水通量(PWP)和標準蛋白的分離效率,判斷膜性能是否恢復。
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